Лейкоцитарная формула (с обязательной микроскопией мазка крови) – подсчет количества общего количества и разных видов лейкоцитов, а также изучение их морфологических особенностей посредством микроскопии мазка периферической крови.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную, капиллярную кровь.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Окраска мазка крови специальными красителями позволяет различать клетки и внутриклеточные структуры, кроме того, разные виды лейкоцитов неодинаково восприимчивы к некоторым красителям и окрашиваются по-разному, что вместе с различиями в их морфологических свойствах (форма ядра, размеры и наличие внутриклеточных гранул) позволяет дифференцировать основные виды лейкоцитов при изучении мазка с помощью микроскопа. Традиционно подсчет проводят на сто клеток и полученные цифры записывают в процентах. Зная общее количество лейкоцитов, проценты можно пересчитать в абсолютные значения, которые гораздо более объективно отражают состояние лейкоцитарной популяции.
Гранулоциты называются так потому, что содержат в своей цитоплазме гранулы, в которых содержатся биологически активные вещества, необходимые для выполнения лейкоцитами своих защитных функций. Выделяют три типа гранулоцитов:
Вышеперечисленные типы лейкоцитов встречаются в мазке периферической крови в норме. При некоторых заболевания в кровь из костного мозга могут выходить клетки, которых в норме в мазке быть не должно: например, бласты – морфологический субстрат острого лейкоза. В заключении к исследованию обязательно указывается количество и по возможности морфологические особенности атипичных клеток.
Помимо подсчета количества клеток, врач лабораторной диагностики при микроскопии мазка крови отмечает изменения морфологии лейкоцитов:
В этой и последующей темах рассматриваются т.н. ткани внутренней среды организма, куда относятся:
соединительные ткани со специальными свойствами (ретикулярная, жировая, слизистая),
а) разнообразие клеток почти в каждой из них,
б) хорошо развитое межклеточное вещество, находящееся в
жидком ( кровь, лимфа ), гелеобразном (собственно соединительн ые ткан и ) или твёрдом (скелетные соединительные ткани) состоянии;
в) происхождение из мезенхимы.
Д анная тема посвящена крови.
Плазма
а) Плазму можно получить путём центрифугирования крови (к которой предварительно добавлены вещества, предотвращающие свёртывание):
воду ( примерно 90 % от массы),
промежуточные или конечные продукты обмена веществ, переносимые из одних органов в другие ;
в свободном состоянии или в связи со специальными транспортными белками.
в) Если же дать крови свернуться, то после отделения сгустка вместо плазмы получается сыворотка крови. Она отличается от плазмы только отсутствием фибриногена.
Форменные элементы
а) К форменным элементам крови относятся:
б) Как видно, по сравнению с эритроцитами,
Динамичес- кое равновесие
а) Каждый компонент крови находится в динамическом равновесии (стационарном состоянии): всё время происходят
поступление в кровь новых порций данного компонента и удаление из крови примерно таких же его количеств.
120 суток.
многократно выходят из крови в разные ткани и вновь возвращаются в кровь,
и общая продолжительность их жизни составляет (в зависимости от вида лейкоцита) от нескольких недель до нескольких месяцев.
8.2.1. Морфология и состав
8.2.1.1. Цитологическая характеристика
ядра, митохондрий, эндоплазматического ретикулума с рибосомами и ряда других органелл.
б) Чаще всего (в 85 %) они имеют форму двояковогнутых дисков диаметром 7,5 мкм.
в) А. При обычной окраске (по Романовскому, т.е. азур II-эозином) ретикулоциты неотличимы от эритроцитов.
а) При т.н. кренировании
образуются выпячивания плазмолеммы (в виде шипов ), а форма клетки приближается к эллипсоидной и затем сферической.
— Дискоциты превращаются в
б) Во втором случае
двояковогнутая форма клетки меняется на вогнуто-выпуклую или куполообразную.
стоматоциты ( 2% ).
8.2.1.2. Молекулярный состав
I. Индивидуальные белки плазмолеммы
В мембране эритроцитов идентифицировано несколько десятков различных белков. Ниже указываются самые известные из них.
Спектрин
а) Спектрин
имеет палочкообразную форму и,
б) Последняя придаёт мембране
Гликофорин
а) Белок гликофорин является интегральным (пронизывает всю толщу мембраны).
б) С внешней стороны мембраны с его пептидной цепью связаны олигосахаридные остатки, в т.ч.
остатки сиаловой кислоты.
в) Последние содержат ионизированные карбоксильные группы, которые придают эритроциту
существенный отрицательный заряд.
б) В отличие от этого, для катионов мембрана эритроцитов практически непроницаема.
II. Групповые антигены плазмолеммы
Природа
а) Мембранные гликопротеиды, благодаря разнообразию своих олигосахаридов на внешней поверхности эритроцита,
б) Исходя из структуры одного из этих антигенов, людей (равно как и кровь) делят на 4 группы ( система АВО ):
0 (I), А (II), B (III), АВ (IV).
в) По структуре ещё одного антигена ( резус-фактора ) людей делят на
резус-отрицательных и резус-положительных.
г) И так далее: существует ещё несколько систем групп крови.
Система АВО
Группа
I (0)
II (A)
III (B)
IV (AB)
Антигены эритроцитов
0
0, А
0, В
0, А, В
Антитела в плазме
антиА, антиВ
антиВ
антиА
нет
а) У людей группы крови I
эритроциты имеют на поверхности антиген 0 (ноль), а в плазме крови циркулируют антитела антиА и антиВ.
б) У людей же группы крови II
эритроциты имеют на поверхности, кроме антигена 0, также антиген А, а в плазме крови циркулирует антитело антиВ.
И так далее: см. таблицу.
Группо- вая несовме- стимость
а) При переливании крови между людьми разных групп может проявляться групповая несовместимость.
б) В частности, это происходит при переливании крови группы II людям группы III (или наоборот). Тогда
во многих секретах (включая слюну, молоко, семенную жидкость) и
на поверхности тромбоцитов и ряда клеток в разных тканях.
III. Важнейшие белки цитоплазмы
8.2.2.1. Строение
Таким образом, Hb является тетрамерным белком.
б) В центре гема находится атом Fe в степени окисления II.
6 координа- ционных связей Fe
а) С помощью шести координационных связей Fe (II)
сам атом Fe закреплён в геме, гем связан с белковой субъединицей, молекула О2 или СО2 связывается с Hb.
б) После разрушения (в селезёнке) эритроцитов и самого Hb
атомы Fe в большинстве своём вновь используются для нужд организма (в т.ч. для синтеза Hb),
а остальная часть гема превращается в желчные пигменты (билирубин и биливердин), которые обусловливают обычный цвет мочи и кала.
8.2.2.2. Виды Hb
Перечень видов Hb
По аминокислотному составу субъединиц, в норме различают следующие виды Hb:
Сродство к кислороду
а) Аминокислотный состав сказывается на сродстве Hb к кислороду.
б) В частности, у Hb F данное сродство выше, чем у Hb А;
благодаря этому, кислород диффундирует
от Hb A (циркулирующего в материнской крови) к Hb F (циркулирующему в крови плода).
Hb A (96 % от всего Hb), Hb A 2 и Hb F (примерно по 2 %).
а) На препаратах основная часть форменных элементов крови представлена эритроцитами (которых, как отмечалось, в 1000 раз больше, чем лейкоцитов).
б) Поэтому в этом поле зрения мы не видим других клеток, кроме эритроцитов.
Полный размер
Морфология эритро- цитов
Эритроциты отличаются характерной морфологией:
8.3.1.1 Классификация (лейкоцитарная формула)
1. В следующей таблице
приведена морфологическая классификация лейкоцитов и указано среднее относительное содержание каждого их вида (от общего числа лейкоцитов).
I.Гранулоциты, или зернистые лейкоциты
II. Агранулоциты, или незернистые лейкоциты
Нейтрофильные гранулоциты, или нейтрофилы
3. Следовательно, различают 5 основных видов лейкоцитов :
нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты и лимфоциты.
8.3.1.2. Функции лейкоцитов
I. Перечень функций
Функции перечисленных видов клеток таковы.-
мигрируют из крови в другие ткани
и здесь фагоцитируют микробы и прочие частицы, что может приводить к местной воспалительной реакции.
б) В очаге воспаления погибшие нейтрофилы и убитые бактерии составляют гной.
Базофилы
а) Базофилы образуют гистамин, который при воспалении и аллергии способствуют
имеют на поверхности специфические иммуноглобулины (выполняющие роль рецепторов),
с их помощью и при участии макрофагов распознают чужеродные агенты ( антигены )
и способствуют их инактивации.
б) Последнее осуществляется
в) В связи с вышеуказанными функциями, лимфоциты часто называют
иммунокомпетентными клетками.
осуществляют фагоцитоз (непосредственный или опосредованный),
3. Известно довольно много разновидностей макрофагов, характерных для разных тканей; они часто имеют специфические названия, и с ними мы познакомимся в последующих темах.
II. Резюме
воспалительной и иммунной реакций организма.
Локализа- ция
а) Свои функции лейкоциты выполняют, в основном, вне кровотока, перемещаясь, благодаря хемотаксису, с помощью псевдоподий.
Теперь рассмотрим морфологию разных видов лейкоцитов.
Гранулоциты имеют 2 характерных признака:
8.3.2.1. Характеристика гранул
I. Подразделение гранул на неспецифические и специфические
а) Дальнейшее подразделение гранулоцитов на 3 вида производится по тинкториальным свойствам гранул.
неспецифические (первичные, или азурофильные) и специфические (вторичные).
Неспеци- фические гранулы
а) Неспецифические гранулы почти одинаковы у всех гранулоцитов.
Специ- фические гранулы
а) Каждый вид гранулоцитов содержит свой вид специфических гранул.
б) Последние, в зависимости от вида клеток, имеют
в) Это определяет тинкториальные свойства а также функциональные возможности клетки в целом.
II. Специфические гранулы
Дадим более подробную характеристику специфических гранул.
б). В них отсутствуют лизосомальные ферменты, но содержатся вещества антибактериального действия —
лизоцим, фагоцитины и другие,
а также фермент щелочная фосфатаза ( в отличие от кислой фосфатазы в неспецифических гранулах).
в) После фагоцитоза бактерий
вначале с фагосомой сливаются вторичные гранулы и убивают бактерию;
затем сливаются первичные гранулы (с лизосомальными ферментами) и переваривают содержимое.
Базо- фильные гранулы
б) Содержат вещества, упоминавшиеся в п. 8.3.1.2:
в) Являются разновидностью пероксисом:
8.3.2.2. Форма ядер
б) Но для эозинофилов, из-за малого их содержания в крови, указанные формы обнаружить очень сложно.
П оэтому в лейкоцитарную формулу (п. 8.3.1.1.) включают юные и палочкоядерные формы только нейтрофилов.
8.3.2.3. Просмотр препаратов: нейтрофилы
2. В отличие от предыдущего случая, ядро ещё не сегментировано, а имеет форму изогнутой палочки.
8.3.2.4. Просмотр препаратов: базофилы и эозинофилы
по наличию специфических мембранных белков-маркёров.
ЗАМЕЧАНИЕ. Кроме Т-киллеров, обнаружены ещё 3 группы лимфоцитов с киллерной активностью (и той же «общей» морфологией):
Особенности функционирования всех этих клеток обсуждаются в теме «Кроветворение» (п. 20.2.5.4).
8.3.3.3. Просмотр препаратов: лимфоциты и моноциты
б) В соответствии с вышеизложенным, он имеет
небольшие размеры, крупное ядро, занимающее основную часть клетки,
узкий ободок базофильной цитоплазмы.
б) Они более, чем вдвое, крупнее окружающих эритроцитов.
8.4.1. Краткая характеристика
8.4.1.1. Структура
отделившиеся в красном костном мозгу от мегакариоцитов (гигантских клеток) и
циркулирующие в крови.
Морфо- логия
а) П о размеру (2-3 мкм ) тромбоциты в несколько раз меньше эритроцитов.
б) А. В центральной части тромбоцит содержит
представлена гранулами (1) нескольких видов, глыбками гликогена (2), ЭПС (3), митохондриями (4)
и является азурофильной (т.е. базофильной ).
б) Эти группы придают тромбоцитам отрицательный заряд.
в) Но главное, с их помощью происходит связывание ряда факторов свёртывания крови.
8.4.1.2. Функции
Благодаря вышеуказанной связывающей способности, тромбоциты принимают активное участие в свёртывании крови:
н а их поверхности происходят ключевые реакции этого сложного процесса.
Связыва- ние факторов свёрты- вания
а) Это осуществляется, во-первых, за счёт того, что
одни факторы (II, или протромбин, и VII) изначально связаны с поверхностью тромбоцита, а другие (фф. X и V) связываются с этой поверхностью после активации.
фосфатными группами тромбоцитов и карбоксильными группами факторов свёртывания.
в) В результате значительно повышается локальная концентрация взаимодействующих факторов свёртывания.
Уплот- нение сгустка крови
а) Кроме того, тромбоциты содержат в своих гранулах фактор XIII.
б) Он высвобождается после лизиса тромбоцитов в первичном сгустке фибрина и катализирует
за счёт образования поперечных сшивок между молекулами фибрина.
1. Здесь мы видим несколько тромбоцитов (1) и палочкоядерный нейтрофил (2).
соединительные ткани со специальными свойствами (ретикулярная, жировая, слизистая),
